数(shù)明小讲堂 | 新冠核酸检(jiǎn)测之PCR技术(shù)
疫情防控
科学防疫 数(shù)明有“芯”
当前上海正处于抗新型冠状(zhuàng)病毒肺炎疫情防控的(de)关键阶段,在这个没有硝烟的战场上,及时快速地筛(shāi)查(chá)新冠感染者并及时进行(háng)隔离是阻(zǔ)止新冠病毒肆意蔓延的最有效且唯(wéi)一的手段。核酸检(jiǎn)测是目前筛查新冠感染者最精(jīng)准、有效、低成本的技术方(fāng)式。
什么是PCR?
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction), 简称PCR, 又(yòu)称多聚酶链式反应,是一项(xiàng)利用DNA双链复制的原理,在生物体外复制特定DNA片段(duàn)的核酸合成(chéng)技术。透(tòu)过(guò)这项技(jì)术,可(kě)在短时(shí)间内大(dà)量扩增目的基因,而(ér)不必依赖大(dà)肠杆(gǎn)菌或酵母菌等生物体。
PCR扩增的三个基本步(bù)骤(zhòu)
(1)变性:模板(bǎn)DNA经加热至94℃左右并保持一定时(shí)间后,基于DNA半保留复制原(yuán)理,还有碱基互补配对原则,即复制(zhì)的过(guò)程中(zhōng)双链DNA会解链,由双链变成单链,为(wéi)下轮反应做准备;
(2)退火:模板DNA经加热变性(xìng)成单链后,温度降(jiàng)至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列(liè)配对(duì)结合;
(3)延伸:温度再升至(zhì)72℃左(zuǒ)右,在(zài)DNA聚合酶的作用下,把游离的dNTP按照碱基(jī)互补(bǔ)配对(duì)原则结(jié)合到单链上,形成一条(tiáo)由旧(jiù)链和新链杂(zá)合(hé)成(chéng)的新的双链(liàn)DNA。
PCR扩(kuò)增原理:变形-退火-延伸(shēn)温度循环
理论上,经过上面(miàn)步骤,目标DNA浓度可增加一倍(bèi)。重复循(xún)环上(shàng)述过程,可获得更多的(de)“半保留复制链”,而形(xíng)成的新链(liàn)又可(kě)成(chéng)为下次循环的模板。每完成一(yī)个循环需2~4分(fèn)钟, 仅(jǐn)需2~3小时就能将(jiāng)目标DNA扩增放(fàng)大几百万倍。
全自动核酸(suān)提纯及实时荧光PCR分析系统
经过以(yǐ)上分析,我们就可以理解为什么核(hé)酸检测结果(guǒ)最快(kuài)能在几个小时内(nèi)出结果(guǒ)。
实时(shí)荧光PCR定量分析
PCR扩增仪温度控制(zhì)指标主要有:温度的准确性、均匀性、以及升降温速度。
1. 温度的准确性:是指样品孔温(wēn)度与设(shè)定温度(dù)的一致(zhì)性,它直接(jiē)关系到实验(yàn)的成败。因而对PCR扩增仪(yí)而言温度控制(zhì)就意味着产品质(zhì)量。
2. 温度的(de)均匀性:是(shì)指样(yàng)品孔间的温(wēn)度差异,它(tā)关系到在不同样品孔进行反应结果的一致(zhì)性。
3. 升降温(wēn)速度:更(gèng)快(kuài)的升降温速(sù)度,可以有效(xiào)缩(suō)短反应时间和可能的非特异性结合、反应的时(shí)间(jiān),从而提(tí)高PCR反应特异性。
相较于传统(tǒng)的相对稳定耐用的机(jī)械式,新的(de)半导体温控(kòng)技术——TEC温度控制技术具有升(shēng)降温更快速的优势,已(yǐ)经成为PCR扩增仪的首选温度控制技(jì)术(shù)。
半导体制冷器 (Thermo Electric Cooler,简称(chēng) TEC) 是利用半导体(tǐ)材料的帕尔贴效应制成的(de)。如图下所示,帕尔帖(tiē)效应(yīng)是指(zhǐ)当直流电流通过两(liǎng)种半导体(tǐ)材料组成的电偶时,其一端(duān)吸(xī)热,一端放(fàng)热的(de)现象。TEC 包括一些(xiē) P 型(xíng)和 N 型对(组),它们通过电极连在一(yī)起,并且夹在两个陶瓷电极之间,当有电流从 TEC 流过(guò)时,电(diàn)流产生的热量会从 TEC 的 一(yī)侧传(chuán)到另一侧,在 TEC 上产生″热″侧和(hé)″冷″侧,这就是 TEC 的加热与致冷原理。
帕尔(ěr)帖效应,PN 节以及热流动(dòng)示意图
PCR扩增仪一般具有(yǒu)两(liǎng)种温控模(mó)式,即模块(kuài)温控(kòng)模式(Block-control)和反应(yīng)管(guǎn)温控(kòng)模式(tube-control)。管内样品(pǐn)的温(wēn)度无法与温控模块同(tóng)时达到(dào)预设温度,特别是PCR反应中的孵(fū)育过程一般为30秒或更短,如果采用只有模块(kuài)温控模式(shì)的话,反应混合(hé)物(wù)孵育(yù)的时间(jiān)与程序设定的时间会(huì)有相(xiàng)当大的差距。为了达(dá)到反应管内部温度精确控制(zhì),需采用反(fǎn)应管控制模(mó)模式,通过温度控制算(suàn)法进行(háng)参数标(biāo)定和补偿,确保反(fǎn)应(yīng)混合物按照程序设定的(de)时间(jiān)维(wéi)持预(yù)设温度(dù)。
科技战“疫”,九游平台和数明在(zài)行动(dòng)
面对近期香港、深圳、上海等地奥密克戎的快速扩散(sàn),核酸检测能(néng)力在(zài)数量和速度方(fāng)面都面临着极大的(de)考(kǎo)验。九游平台和数明半导体积极发挥(huī)了科技(jì)技术方面的优势(shì),组(zǔ)织技术(shù)专家研究(jiū)PCR扩增技术(shù)的优化解决方案,以功率器件(jiàn)门极(jí)驱动(dòng)芯片和TEC控制器为着力(lì)点,优先保障芯(xīn)片供应和(hé)交(jiāo)付,与客(kè)户一起助(zhù)力抗疫,共克时艰。
九游平台和数明半导体自研的20V-600V耐(nài)压全系(xì)列的低边、半桥、三(sān)相半桥(qiáo)等功率管门极(jí)驱(qū)动芯片(SLM2103S、SLM2136等)可(kě)用于驱动TEC,协助(zhù)PCR扩(kuò)增仪器客(kè)户快速、方便地完成系(xì)统(tǒng)设计,在(zài)当前半导体供应短缺时期,可(kě)以(yǐ)满足客户设计(jì)方(fāng)案的快速(sù)变更、验证(zhèng)与(yǔ)量产。
600V耐压(yā)半桥(qiáo)功率器件驱动芯片工作示意图
600V耐压(yā)三相半桥功(gōng)率(lǜ)器(qì)件(jiàn)驱动芯片工(gōng)作示意图
九游平台和数明半(bàn)导体的单芯片TEC控制器产品——SLM8833/8834/8835 集成(chéng)了TEC驱动电路(lù)、低温飘高精(jīng)度温(wēn)度误差放大器及(jí)环路(lù)补偿电路、温(wēn)度设定与传(chuán)感电路,采(cǎi)用高效的单电感架(jià)构,实现(xiàn)更紧(jǐn)凑、更高的转换效率及更低的噪声;其中功率级集(jí)成(chéng)了超(chāo)低阻(zǔ)抗(kàng)的(de)MOSFET,损耗更低寿命更久;同时(shí)匹配模拟PID与数字PID两种温(wēn)控(kòng)模(mó)式,以满足客户PCR扩增仪的小(xiǎo)型化创新(xīn)设(shè)计需求。
由SLM8834 构成(chéng)的 TEC 系统框图
模拟PID温控(kòng)器(qì)模式(shì)
数字PID温控模式